Para la detección y enumeración de E. coli y coliformes en el agua potable mediante la técnica de filtración por membrana.

Principios y Usos

Agar Chapman TTC (Agar TTC con Lactosa y Tergitol 7) es un medio selectivo y diferencial utilizado para el control presuntivo de E. coli y coliformes en aguas para consumo humano mediante la técnica de filtración por membrana.

La peptona y el extracto de carne proporcionan nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el crecimiento. El extracto de levadura es fuente de vitaminas, particularmente del grupo B. La lactosa es un hidrato de carbono fermentable que proporciona carbono y energía. El heptadecilsulfato sódico (Tergitol 7) y el TTC inhiben la mayoría de las bacterias Gram positivas. El azul de bromotimol es un indicador de pH. El agar bacteriológico es el agente solidificante.

Instrucciones de Uso

Para la detección y enumeración de Escherichia coli y bacterias coliformes en muestras de agua:

Filtrar dos muestras de agua sobre dos membranas diferentes e incubar en Agar Chapman TTC a 36±2 °C y 44±4 °C respectivamente, durante 21±3 horas.

Las colonias típicas tienen el aspecto siguiente:

• E. coli y Citrobacter spp. presentan colonias amarillas con centro anaranjado.
• Enterobacter spp. forma colonias de color rojo y amarillo oscuro con centro de color naranja. El medio es amarillo.
• Klebsiella spp. forma colonias de color rojo o amarillo, pero sin centro. El medio es amarillo.
• Bacterias no fermentadoras de lactosa crecen con colonias de color púrpura y cambian el medio a azul.

Las especies Klebsiella y Enterobacter también pueden producir colonias amarillo-verdes.

Procedimiento de confirmación:

• Los resultados siempre se referirán a conteos por 100 ml de muestra, considerando si ha sido necesario realizar diluciones.
• Contar como bacterias lactosa positivas las colonias que presentan un desarrollo de color amarillo del medio bajo la membrana.
• Subcultivas las colonias características obtenidas, en agar no selectivo y Caldo de Cultivo Triptófano (Cat. 1237).
• Realizar la prueba de oxidasa e incubar los tubos de Caldo de Cultivo Triptófano a 44±0,5 °C durante 21±3 horas.
• La producción de indol se determina agregando unas gotas de reactivo de Kovac (Cat. 5205) a los tubos de Caldo de Cultivo Triptófano incubados. Una prueba positiva está indicada por el desarrollo de color rojo en la capa de reactivo.
• Las colonias que son oxidasa negativas se considerarán bacterias coliformes y las colonias que son oxidasa negativas e indol positivas se considerarán E. coli.

Preparación del Medio

Suspender 56,15 gramos del medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y disolver con calor y agitación frecuente. Hervir durante un minuto hasta la disolución completa. Esterilizar en autoclave a 121 °C durante 15 minutos.

Enfriar a 45-50 °C y agregar asépticamente 2,5 ml de