El Agar Citrato de Simmons se utiliza para diferenciar bacilos entéricos Gram negativos en base al citrato de sodio como fuente de carbono y a la sal de amonio inorgánica como fuente de nitrógeno. Se recomienda para la diferenciación de coliformes aislados del agua y muestras clínicas.

Se usa de la misma manera que el Caldo de Citrato Koser (Cat. 1200) utilizando una de las reacciones de IMViC; prueba del citrato. El sulfato de magnesio es un cofactor para diversas reacciones metabólicas. El cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico. El fosfato dipotásico actúa como un sistema tampón. El azul de bromotimol es un indicador de pH. El dihidrógeno fosfato de amonio es la única fuente de nitrógeno. El citrato de sodio es la única fuente de carbono. El agar bacteriológico es el agente solidificante.

Solo los organismos capaces de utilizar citrato como fuente de carbono crecen y producen un cambio de color de verde a azul (alcalino), mientras que cuando no se utiliza citrato (prueba negativa), el color del medio permanece igual.

Escherichia coli, junto con las especies Shigella, Yersinia y Edwardsiella, no crecen en el medio. Serratia y la mayoría de las especies de Enterobacter, Citrobacter, Klebsiella, Proteus y Providencia, a excepción de Morganella morganii y Klebsiella rhinoscleromatis, utilizan citrato y producen la coloración azul típica.

Agar Citrato de Simmons también se usa para diferenciar Salmonella enteritidis y miembros de Salmonella subgenus II, III, IV citrato positivo de Salmonella typhi, Salmonella paratyphi A, Salmonella pullorum y Salmonella gallinarum citrato negativo.

ISO 10273 recomienda este medio para la confirmación de Yersinia enterocolitica. El medio permanece verde ya que Yersinia enterocolitica no usa citrato como única fuente de carbono.

Suspender 24,3 gramos del medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y disolver con calor y con agitación frecuente. Hervir durante un minuto hasta la disolución completa. Dispensar en tubos y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. Dejar enfriar en una posición inclinada para obtener fondos de tubo cortos de 1 a 1,5 cm de profundidad. Alternativamente, el medio se puede verter en placas de Petri.

Para diagnóstico clínico (muestras de bacterias aisladas de heces):

• Inocular los agares inclinados con el crecimiento de un cultivo puro o utilizar un inóculo diluido
• Incubar todos los tubos a 35±2°C durante 24-48 horas en atmósfera aerobia
• Lectura e interpretación de los resultados

Para confirmación de Yersinia enterocolitica patógena de acuerdo a ISO 10273:

• Obtener una colonia pura del organismo de prueba
• Sembrar en estrías con el asa de siembra la superficie de la placa de Agar Citrato de Simmons o, sembrar la superficie inclinada e introducir el inóculo en la base del tubo
• Incubar a 35±2°C durante 24-48 horas
• Para el cultivo de Yersinia enterocolitica incubar a 30°C durante 24±2 horas
• Si no se obtienen buenos resultados, como en el caso de algunas cepas de Providencia<