Principios y Fundamento

Stone sugirió que la actividad de la gelatinasa es indicativo de microorganismos contaminantes en alimentos. Posteriormente Chapman, Lieb y Curcio reportaron que las cepas típicas de Staphylococcus patógenos fermentan el manitol, producen pigmento y licuan la gelatina. Chapman utilizó esas propiedades para desarrollar este medio selectivo y diferencial.

En este medio la peptona provee la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales; el extracto de levadura proporciona vitaminas del complejo B; la alta concentración de cloruro de sodio (75 g/L) tiene efecto en el desarrollo selectivo de Staphylococcus. La lactosa y el D-manitol son los hidratos de carbono fermentables.

La fermentación del manitol produce ácidos que se revelan con azul de bromotimol (colonias amarillas). La gelatina es el sustrato para la enzima gelatinasa. Los Staphylococcus coagulasa positivo resisten altas concentraciones de NaCl.

Uso Recomendado

Medio selectivo y diferencial para el cultivo y aislamiento de Staphylococcus. Permite la diferenciación en base a la fermentación de manitol, la formación de pigmento y la hidrólisis de gelatina.

Preparación

Suspender 149.0 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir durante un minuto.

Esterilizar en autoclave a 121°C (15 libras de presión) durante 15 minutos. Enfriar a 45-50°C y vaciar en placas de Petri estériles.

pH final: 7.0 ± 0.2 a 25°C

Procedimiento

1. Sembrar las muestras según procedimientos establecidos e incubar a 35 ± 2°C durante 24-48 horas.
2. Fermentación del manitol: Adicionar 1 gota de indicador de azul de bromotimol al 0.04% en el lugar donde previamente se ha tomado una colonia.
3. Prueba de gelatinasa: Adicionar 5 mL de una solución saturada de sulfato de amonio, incubar las placas a 35 ± 2°C durante 10 minutos. Una zona clara alrededor de la colonia indica hidrólisis de la gelatina.

Fórmula (por litro)

Control de Calidad

El medio preparado debe ser claro a ligeramente turbio. Las siguientes cepas ATCC se utilizan para el control de calidad microbiológico: