Principios y Usos

El Agar Mueller Hinton II se desarrolló originalmente para el cultivo y aislamiento de cepas patógenas de Neisseria. Se vio que este medio era útil para identificar cepas de gonococos sensibles y resistentes a la sulfonimida. Sin embargo, el Agar Mueller Hinton ahora se utiliza en pruebas de susceptibilidad de discos antimicrobianos.

Bauer y Kirby desarrollaron un procedimiento estandarizado para determinar la susceptibilidad de las bacterias a los antibióticos, en el cual se seleccionó el Agar Mueller Hinton como medio estándar, porque los laboratorios de microbiología clínica en los años 60 utilizaban una amplia variedad de medios y procedimientos diferentes. Su rendimiento está especificado por el CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute), y se recomienda para cultivar patógenos bacterianos aerobios o anaerobios facultativos y especies fastidiosas como H. influenzae, N. gonorrhoeae o S. pneumoniae, cuando se agrega sangre de oveja desfibrinada.

El Agar Mueller Hinton II se fabrica de tal manera que contiene niveles bajos de timina y timidina, y niveles controlados de calcio y magnesio. El uso de un medio con características de crecimiento adecuadas es esencial para probar la susceptibilidad de los microorganismos a los antibióticos. También se recomienda para el desarrollo de las bacterias anaeróbicas, aeróbicas y facultativas más comunes.

La infusión de carne res y la peptona ácida de caseína (H) proporcionan nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el crecimiento. El almidón absorbe cualquier metabolito tóxico producido. El agar bacteriológico es el agente solidificante.

Aplicaciones

Industria: Clínica / Test de Susceptibilidad Antimicrobianos

Preparación del Medio

Suspender 38 gramos del medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y disolver calentando agitando con frecuencia. Hervir durante un minuto hasta disolver por completo. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.

Enfriar a 45-50°C y agregar sangre desfibrinada si se desea. La mezcla de sangre se debe chocolatear calentando a 80°C durante 10 minutos si se desea el desarrollo de Neisseria. NO SOBRECALENTAR. Para volver a fundir el medio frío, calentarlo más brevemente posible.

Fórmula Típica (g/L)

*Fórmula ajustada y/o suplementada según sea necesario para cumplir con los criterios de rendimiento.

Instrucciones de Uso

Para diagnóstico clínico (bacterias aisladas de orina):

• Inocular según método Bauer-Kirby
• Incubar en condiciones aeróbicas a 35±2°C durante 24-48 horas
• Lectura e interpretación de los resultados

Para pruebas de susceptibilidad de antibióticos:

• Dispensar el medio en placas Petri estériles para obtener una profundidad de 4±0,5 mm (aproximadamente 25 mL en una placa circular de 90 mm, 31 mL en una placa circular de 100 mm, 71 mL en una placa circular de 150 mm y 40 mL en una placa cuadrada de 100 mm)
• Ajustar la densidad de la suspensión del organismo a 0,5 MacFarland. Un inóculo más denso producirá zonas de inhibición más reducidas y un inóculo menor dará lugar al efecto opuesto
• La suspensión no debe usarse después de 15 minutos y siempre se usará antes de 60 minutos de preparación
• Sumergir un hisopo de algodón estéril en la suspensión
• Para evitar la sobreinoculación de bacterias gramnegativas, eliminar el exceso de líquido presionando y girando el hisopo contra el interior del tubo
• Para bacterias grampositivas, no presionar ni girar el hisopo contra el interior del tubo
• Aplicar los discos antes de que pasen 15 minutos desde la inoculación