Principios y Usos
El Agar Mueller Hinton, junto con el Caldo Mueller Hinton (Cat. 1214), se usa para testar la susceptibilidad antimicrobiana de organismos aeróbicos de crecimiento rápido a partir de muestra clínica y se ha convertido en el medio estándar para el método de Bauer-Kirby de acuerdo a las normas de Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) y European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST).
El principal objetivo de las pruebas de susceptibilidad a antimicrobianos in vitro es el proporcionar una guía para el manejo terapéutico de las enfermedades infecciosas a través de la sensibilidad o resistencia de bacterias patógenas aerobias y anaerobias facultativas a diferentes compuestos antimicrobianos.
Debido a que es imposible predecir la susceptibilidad de una bacteria responsable de una determinada infección a los antimicrobianos, las pruebas de susceptibilidad a antibióticos efectuadas en el laboratorio microbiológico se convierten en un instrumento esencial para el manejo terapéutico de los pacientes.
En el medio, la infusión de carne y la peptona de caseína ácida (H) proporcionan nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales para el crecimiento. El almidón absorbe cualquier metabolito tóxico producido por el crecimiento microbiano y el agar bacteriológico es el agente solidificante.
Preparación del Medio
Suspender 38 gramos del medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y disolver con calor y agitación frecuente. Hervir durante un minuto hasta disolver por completo. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos. Enfriar a 45-50°C y agregar sangre desfibrinada si se desea. La mezcla de sangre se debe chocolatear calentando a 80°C durante 10 minutos si se desea el desarrollo de Neisseria. NO SOBRECALENTAR. Para volver a fundir el medio frío, calentarlo lo más brevemente posible.
Instrucciones de Uso
Para el diagnóstico clínico mediante pruebas de sensibilidad a antibióticos, el tipo de muestra son bacterias aisladas de cualquier tipo de muestra clínica (orina, sangre, recto, esputo, etc.):
- Dispensar el medio en placas Petri estériles para obtener una profundidad de 4 ± 0,5 mm (aproximadamente 25 mL en una placa circular de 90 mm, 31 mL en una placa circular de 100 mm, 71 mL en una placa circular de 150 mm y 40 mL en una placa cuadrada de 100 mm).
- Ajustar la densidad de la suspensión del organismo a 0,5 MacFarland. Un inóculo más denso producirá zonas de inhibición más reducidas y un inóculo menor dará lugar al efecto opuesto.
- La suspensión no debe usarse después de 15 minutos y siempre se usará antes de 60 minutos de preparación.
- Sumerja un hisopo de algodón estéril en la suspensión.
- Para evitar la sobreinoculación de bacterias gramnegativas, elimine el exceso de líquido presionando y girando el hisopo contra el interior del tubo.
- Para bacterias grampositivas, no presionar ni girar el hisopo contra el interior del tubo.
- Aplique los discos antes de que pasen 15 minutos desde la inoculación.
- Incubar a una temperatura de 37 ± 1°C durante 24 horas.
- Los resultados son tomados desde el borde donde se observa inhibición completa con la placa a unos 30 cm del ojo.
- Leer las placas de MH desde la parte posterior sobre un fondo oscuro iluminado con luz reflejada.
- En caso de colonias distintas dentro de las zonas, verificar la pureza y repetir la prueba si es necesario.
- Para Proteus spp., ignorar el swarming y leer inhibición del crecimiento.
- En caso de zonas dobles, leer la zona interna.
Para el cultivo de Neisseria:
- Incubar las placas a una temperatura de 37 ± 1°C en una atmósfera de CO₂ durante 18-24 horas.
📋 Cumplimiento normativo: Este medio cumple con las especificaciones de CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) y EUCAST (European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing) para pruebas de sensibilidad antimicrobiana.
