Agar Chapman Stone

Medio selectivo y diferencial para el aislamiento de estafilococos patógenos en alimentos

Principios y Usos

El Agar Chapman Stone se utiliza para el aislamiento de estafilococos patógenos en alimentos. Es un medio similar al Agar Estafilococos Nº110 (Cat. 1032), pero contiene sulfato de amonio para detectar la actividad de la gelatinasa (reacción de Stone), y la concentración de cloruro de sodio se reduce al 5,5%.

La principal modificación es la inclusión de sulfato de amonio en el medio, que permite la observación directa de la hidrólisis de la gelatina sin agregar reactivos a la placa. El sulfato de amonio precipita la gelatina no hidrolizada, apareciendo un halo transparente alrededor de las colonias gelatinasa positivas.

La peptona de caseína proporciona nitrógeno, vitaminas, minerales y aminoácidos esenciales. El extracto de levadura es fuente de vitaminas del grupo B. El D-manitol es el carbohidrato fermentable que proporciona carbono y energía. El cloruro de sodio en altas concentraciones inhibe la mayoría de las bacterias, excepto los estafilococos. La gelatina es una proteína derivada de la hidrólisis del colágeno, utilizada para determinar la capacidad de las bacterias de lisarla. El agar bacteriológico es el agente solidificante.

Las colonias estafilocócicas son de color amarillo, amarillo-dorado o naranja, fermentan el manitol, son coagulasa positivas, producen β-hemólisis en medios como Agar Sangre (Cat. 1108) y son positivas a la gelatinasa (reacción de Stone positiva). Cualquier colonia pigmentada (amarilla o naranja suave) rodeada por una zona clara es probablemente un estafilococo patógeno. Las colonias pálidas sin pigmento no deben considerarse positivas y se identifican como presuntas colonias de S. epidermidis.

Instrucciones de Uso

Método de siembra en superficie:

• En una placa de Petri, agregar 12-15 ml de agar fundido y dejar solidificar
• Inocular 10 μl de la suspensión inicial y/o muestra diluida
• Extender el inóculo con asa de siembra estéril sobre la superficie del agar
• Incubar las placas en posición invertida a 30±2°C durante 18-48 horas
• Examinar el crecimiento y la presencia o ausencia de zonas claras (halos) alrededor de las colonias
• Para determinar la fermentación de manitol, agregar unas gotas de púrpura de bromocresol. Cualquier cambio en el color del indicador indica fermentación de manitol

Resultados previstos:

• Fermentación de manitol: Positivo = cambio del indicador a amarillo. Colonias amarillas o anaranjadas rodeadas por zona clara se identifican como presuntos estafilococos
• Actividad de gelatinasa: Reacción de Stone positiva = formación de zonas claras (halos) alrededor de las colonias

Preparación

Suspender 202,5 gramos del medio en un litro de agua destilada. Mezclar bien y disolver por calentamiento agitando con frecuencia. Hervir durante un minuto hasta su completa disolución. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 10 minutos. Enfriar a 50°C, mezclar bien y distribuir en placas.

Fórmula Típica

* Fórmula típica ajustada y/o suplementada según sea necesario para cumplir con los criterios de rendimiento.

pH final: 7,0 ± 0,2 (a 25°C)

Control de Calidad